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点击磜en?65 发布shi间:2020-06-03

原代细胞培养是建yi细胞系的di一步,但是有很多小伙伴zai原代细胞上就会有很多疑惑哦,主yao有以下糵u體en题,小编都为大jia整理好咯,搬上你的小板凳,一起来看看!

 一、原代细胞与细胞系有什么区别?

答:genju传tong定义,自组织di一磜en栈窈徒又值南赴籧hen为原代细胞,这lei细胞直接从组织fen离,生ming周期有限,经数磜ei鷋ou会逐渐ting止生chang。原代细胞zai有限的生ming周期na需zhangwo好细胞的大生chang空间,以baochi细胞群zhong基因型和表型的一致性。

细胞系是不断生chang、fenhua的细胞群,因qi经过遗传gaizao,致使qi具有wu限增chang的潜neng。体外生chang的细胞系用于yi疗或科yan。

但蔰ao噬希齝hangshi间、连续的传代培养hou,细胞系随zhou代数的增加,细胞的基因型和表型都有可neng发生gai变。

需yao指出的是,zai不tong祄u苰an小组zhong这xie术语的定义会有所不tong。许多yanjiu员不用细胞系这个磗hi硎鞠赴海齠ei细胞经过了遗传gaizao。 

er、倍增和代数有什么区别?

答:倍增是培养物zhong细胞总数的fan倍,通常是指细胞指数或对数生chang期。代数是指细胞群从培养pingzhong移出,传代培养过程的磜en嘌膍u的,是使细胞处于低密度以刺激qijin一步生chang。 

 三、接shou到的冻存细胞该如簑ei恚军/strong>

答:shou到包zhuangxianghou,立即将冻存细胞从干冰移入yedanzhong冻存。此过程尽量快,以bi免升温。不yao将细胞储存zai-80℃,这样会对细胞zao成不可挽回的伤害。 

四、冻存的细胞该如何开始培养?

答:主yaofen为以下9点:

1.将一管细胞从yedan罐zhongqu出,注意baohu手和眼jing。

2.将冻存管快速的放入37℃水浴zhong,轻轻wo住并旋转,直到管na物体wan全融hua。

3.将冻存管立即从水浴zhong拿出,擦干,转入wujun环境。

4.用70%的jiu精chong洗冻存管,然hou擦去多余jiu精。

5.打开gai子,注意手指不yao碰到里面的螺纹(注意,由于冻存管有负压,开gaishi可neng会有少量yi出,这是正常现象)。

6.用多聚赖氨酸(或瞱o誷huo明书)包被培养ping。多数细胞推荐的接种密度为每pingfang厘米5000个细胞。

7.gai好培养ping的gai子,轻轻摇晃培养ping以使细胞fen布均詑uH粜鑩ao气体交换可打开gai子。

8.将培养ping放入培养xiangzhong(37℃,5%CO2,95%縵hang?/p>

9.放入培养xianghou第6-16小shi更换一次培养基,以去除残留的er甲基亚feng和weitiebi的细胞。 

wu、细胞培养过程zhong,多jiu更换一次培养基?

这qu决于细胞生chang的速秖uR籦an而言2-3天更换一次培养基,许多细胞培养实验室通常zai周一,周三,周wu更换培养基。

注意:冻存细胞fu苏hou,zai6-16小shina更换培养基,以去除残留的er甲基亚feng和si亡的细胞。 

六、我neng扩增培养和再次冻存原代正常renlei细胞ma?

答:这qu决于细胞的lei型。一xie细胞lei型xiang神经细胞,神经胶质细胞和一xie生chang缓慢的上pi细胞,不推荐扩增培养和再次冻存。qi它的细胞lei型xiang成bet体育万博细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等,可以扩增培养和再次冻存。

然而,需yao注意的是再次冻存的过程可nengdao致细胞生chang性neng的gai变。

七、培养pingzhong应该加入多少体积的培养基?

答:我们推荐的用量为:T-25培养ping5ml,T-75培养ping15ml,T-150培养ping30ml。

 

    

 
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